分子水平
 
发布时间: 2012-11-27 浏览次数: 412

 

 

目前本实验室可运用各种分子生物学实验手段,对各类化合物抗肿瘤作用机制进行深入研究。

1)        反转录聚合酶链反应:利用RT-PCR初步判断化合物对目的基因的影响。

2)        Northern印迹法:RNA经甲醛或乙二醛二甲基亚砜变性后,经琼脂糖凝胶电泳能分离、解旋成单链,电泳迁移率与分子量的对数呈反比,再将RNA转移到能吸附其单链的硝酸纤维素膜上,加热固定并与所需放射性探针杂交,杂交后充分洗膜,除去未杂交上的探针,进行放射自显影,只有与探针互补的RNA片段才能显示出来,从而可以确定特异的RNA片段。

3)        荧光实时定量PCR:在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号出现的先后顺序以及信号强弱的变化来即时分析目的基因的拷贝数目,通过与加入已知量的标准品进行比较,可实现实时定量。

4)        DNA重组:DNA重组又称基因克隆或分子克隆,是DNA片段在胞内、胞间和不同物种间的交换,发生分子间共价连接,交换后的片段仍可复制、表达,最终把一个生物体中的遗传信息(DNA)转入另一生物体。

5)        基因转染:把已克隆基因、含有目的基因的DNA片段或序列等导入体外细胞基因组来观察目的基因的表达,属于基因转导的一类,有磷酸钙法、电击法、脂质体法、显微注入法、逆转录病毒介导法等。

6)        RNA干扰:是一种由双链RNA诱发的基因沉默(gene silencing。与双链 RNA 有同源序列的mRNA被降解,抑制了基因表达。

7)        流式细胞术:对单个细胞和DNARNA及蛋白质进行快速测量和自动分析的高技术,其原理是被荧光染色的悬浮分散细胞一个个依次通过测量区时,产生电信号,可被电脑测量、存贮、显示。利用流式细胞术研究抗肿瘤药物对肿瘤细胞的作用包括观察药物对细胞周期的影响,研究细胞对药物敏感时相及药物诱导细胞分化或杀伤的特点。

8)        免疫荧光:根据抗原抗体反应原理,将已知抗原或抗体制成荧光标记物,作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原或抗体。细胞或组织中形成的抗原抗体复合物含有荧光素,受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),用荧光显微镜观察可见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质、位置或测定含量。

9)        免疫组化:免疫组织化学是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量研究。

10)    免疫印迹:免疫印迹(western blot)是将蛋白质转移到膜上,利用抗体进行检测。检测化合物对蛋白表达的影响。

11)    免疫沉淀:利用抗原抗体的特异性结合以及细菌蛋白质特异结合到免疫球蛋白FC片段的方法,检测、定量蛋白质复合体中的目标蛋白的表达情况。